Dosage du glucose par le DNS

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Le dosage du glucose par le DNS est un dosage colorimétrique du glucose.

Sommaire

1 Principe
2 Protocole

[modifier] Principe

On utilise les propriétés réductrices du glucose. À chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique : DNS (acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur.

Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque (3-amino-5-nitrosalicylique) :

Le glucose, quant à lui est oxydé en divers produits d'oxydation :

$Glc \longrightarrow produits \, d'oxydation + ne^{-}$

L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas stœchiométrique : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'ose si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine.

Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.

[modifier] Protocole

[modifier] matériel

Spectrophotomètre ;
tubes à essais lavés et secs ;
pipette automatique ;
bechers ;
cuves à spectrophotomètre.

[modifier] Solutions

DNS;
Solution de glucose à 0.0100 mol/L ;
eau distillée ;
Solution à doser.

[modifier] Etapes

[modifier] Préparation de la gamme d'étalonnage

Dans une série de tubes :

- introduire 0-0,3-0,6-0,9-1,2-1,5 mL de solution de glucose à 0.0100 mol/L
- Ajuster chaque tube à 3 mL avec de l'eau distillée
- Ajouter 2mL de réactif 3-5 DNS

Mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium. Porter au bain marie à 100°C pendant 5 minutes exactement. Refroidir et ajouter 15 mL d'eau distillée dans chaques tubes, homogénéiser et laisser reposer pendant 15 minutes. Lires les absorbances à 350 nm contre le témoin.

[modifier] Essais

Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires.
Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 et de 1 mL

[modifier] Tableau colorimétrique

Tableau colorimétrique ( résultats expérimentaux )
Tubes	0	1	2	3	4	5	$x 1$	$x 2$
Solution de glucose à 0,01 mol/L en mL	0	0,45	0,6	0,9	1,2	1,5	0	0
Eau en mL	18	17,7	17,4	17,1	16,8	16,5	17,5	17
DNS en mL	2	2	2	2	2	2	2	2
Essais en mL	0	0	0	0	0	0	0,5	1
Absorbance à λ = 350 nm	0	0,205	0,494	0,748	1,022	1,280	0,668	1,340
Quantité de glucose en µmol	0	3	6	9	12	15	7.94	?