Hämatoxylin-Eosin-Färbung
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Die Hämatoxylin-Eosin-Färbung (abgekürzt HE-Färbung) ist ein Färbeverfahren der histologischen Technik, mit dem die verschiedenen Strukturen eines feingeweblichen Schnittes angefärbt werden können. Es ist die weltweit übliche Routinefärbemethode für die morphologische Diagnostik zur Erstellung von feingeweblichen Befunden. Der Pathologe kann mithilfe dieser Übersichtsfärbung krankhafte Veränderungen in Biopsien und Operationspräparaten erkennen. Sie dauert je nach verwendeten Protokollen und Färbelösungen zwischen 5 und 45 Minuten und ist Teil einer umfangreichen Gewebeverarbeitung, die ein bis mehrere Tage umfasst.
Hämatoxylin ist ein natürlicher Farbstoff aus dem Blauholzbaum. Um seine färbende Eigenschaft zu entwickeln, muss es zu Hämalaun (basischer Hämateinlack) aufbereitet werden. Hämalaun färbt alle sauren/basophilen Strukturen blau (DNA; Zellkern; rER usw.). Eosin (synthetischer, saurer Farbstoff) färbt alle acidophilen/eosinophilen/basischen Strukturen rot, was vor allem die Zellplasmaproteine umfasst. Nach der H-Färbung erscheinen die Zellkerne zunächst rötlich-braun aufgrund des niedrigen pH-Wertes der Färbelösung. Durch Erhöhung des pH-Wertes (Bläuen) schlägt der Farbton in das typische blau-violett um. Gebläut wird durch Spülen in Leitungswasser. Anschließend folgt die Zytoplasma-Färbung in einer alkoholischen oder wässrigen Lösung von Eosin. Durch weitere Spülschritte über Alkohollösungen in aufsteigender Konzentration bis zu absolutem Alkohol wird das Wasser aus dem Gewebeschnitt verdrängt. Schließlich wird der entwässerte Schnitt in einem organischen Lösungsmittel (beispielsweise Xylol) geklärt und kann nun mit einem acrylathältigen Eindeckmittel und einem Deckgläschen bedeckt werden. So bleiben Schnitt und Färbung für Jahrzehnte erhalten und mikroskopierbar.
[Bearbeiten] Protokollbeispiel:
für FFPE (formalin-fixiertes paraffin-eingebettetes) Gewebe
1. Schnittherstellung, Aufziehen des Schnittes auf Glasobjektträger
2. Antrocknen etwa 30 min bei 60 °C
3. 3 x 5 min Xylol zum Entparaffinieren des Gewebes
4. 96-80-50 % Alkohol bis Aqua dest. je 1 min
5. 10 min Mayers Hämalaun
6. Spülen in Aqua dest.
7. Bläuen in Leitungswasser 3-5 min
8. 2 % wässriges Eosin angesäuert mit Essigsäure 45-60 sek
9. Spülen in Aqua dest.
10. 96 %-96 %-100 % Alkohol kurz spülen
11. Xylol
12. aus Xylol heraus eindecken
