DAPI

Z Wikipedii

Wzór strukturalny DAPI

DAPI lub 4',6-diaminoino-2-fenylindol - barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA (dwuniciowego) na zasadzie interkalacji ^[1],[2]. Powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych lub chromosomów (poprzez wizualizację DNA) w mikroskopii fluorescencyjnej ^[3]. Ponieważ DAPI przenika przez nienaruszone błony biologiczne, może być używany do wybarwiania zarówno żywych komórek jak i utrwalonych ^[4].

W mikroskopii fluorescencyjnej DAPI jest wzbudzany światłem ultrafioletowym. Związany do DNA ma maksimum absorpcji przypadające na długość fali świetlnej równą 358nm, a maksimum emisji przy 461nm (kolor niebiesko-fioletowy). DAPI wiąże się także do RNA, aczkolwiek słabiej. Maksimum emisji DAPI związanego z RNA jest przesunięte do około 400nm ^[5].

Niebieska emisja DAPI jest bardzo wygodna w obrazowaniu fluorescencyjnym przy użyciu kilku różnych barwników jednocześnie, ponieważ nie pokrywa się ona z emisją innych popularnych fluoroforów (na przykład zielonym GFP czy fluoresceiną).

Poza wybarwianiem jąder komórkowych, DAPI jest także używane do wykrywania mykoplazm ^[6] lub wirusów (także na zasadzie wiązania ich DNA) ^[7] w kulturach komórkowych.

Ponieważ DAPI wiążę się bardzo ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym zaburza jego strukturę, związek ten jest toksyczny i mutagenny. Przy pracy z DAPI powinno się zachować szczególną ostrożność.

Jądra komórek tworzących wysepkę Langerhansa wybarwione na niebiesko za pomocą DAPI.
Po lewej obraz z nałożononymi sygnałami ze wszystkich kanałów, po prawej obraz z kanału z sygnałem pochodzącym tylko od DAPI.

[edytuj] Odnośniki

• Grossgebauer K, Kegel M, Dann O. [New fluorescent microscopical technique in diagnostic microbiology (author's transl)] Dtsch Med Wochenschr. 1976 Jul 16;101(29):1098-9.

1. ↑ Chandra P, Mildner B, Dann O, Metz A. Influence of 4'-6'-diamidino-2-phenylindole on the secondary structure and template activities of DNA and polydeoxynucleotides. Mol Cell Biochem. 1977 Dec 29;18(2-3):81-6.
2. ↑ Manzini G, Barcellona ML, Avitabile M, Quadrifoglio F. Interaction of diamidino-2-phenylindole (DAPI) with natural and synthetic nucleic acids. Nucleic Acids Res. 1983 Dec 20;11(24):8861-76.
3. ↑ Lin MS, Alfi OS, Donnell GN. Differential fluorescence of sister chromatids with 4'-6-diamidino-2-phenylindole. Can J Genet Cytol. 1976 Sep;18(3):545-7.
4. ↑ Hull HM, Hoshaw RW, Wang JC. Cytofluorometric determination of nuclear DNA in living and preserved algae. Stain Technol. 1982 Sep;57(5):273-82.
5. ↑ Manzini G, Xodo L, Barcellona ML, Quadrifoglio F. Interaction of DAPI with double-stranded ribonucleic acids. Nucleic Acids Res. 1985 Dec 20;13(24):8955-67.
6. ↑ Jagielski M, Zaleska M, Kaluzewski S, Polna I. [Applicability of DAPI for the detection of Mycoplasms in cell cultures/Zastosowanie DAPI do wykrywania mykoplazm w kulturach komórkowych] Med Dosw Mikrobiol. 1976;28(2):161-73.
7. ↑ Mildner B, Chandra P. [Molecular mechanism of action of diamidinephenylindole (DAPI). II. Effect of DAPI on the template activity of DNA and polydeoxynucleotides in the DNA-polymerase system from bacteria, eukaryotic cells and RNA tumor viruses (author's transl)] Cell Mol Biol Incl Cyto Enzymol. 1979;25(6):399-407.