Gramovo barvení
Z Wikipedie, otevřené encyklopedie
Gramovo barvení je jednoduchá metoda barvení o několika krocích, která ve svém výsledku rozliší bakterie na dvě velké skupiny lišící se v uspořádání buněčné stěny: grampozitivní bakterie a gramnegativní bakterie. Tuto techniku vyvinul roku 1884 dánský vědec Hans Christian Gram, aby s její pomocí snadno rozeznal pneumokoky od Klebsiela pneumoniae. Jde o naprosto nejzákladnější metodu barvení v bakteriologii.
Obsah |
[editovat] Stručný popis základních kroků
- fixace vzorku
- primární barvení krystalickou violetí (vše je nyní modrofialové)
- fixace obarvení Lugolovým iódovým roztokem (vše stále modrofialové)
- odbarvení acetonem nebo etanolem (grampozitivní modrofialové, gramnegativní odbarvené)
- barvení safraninovým roztokem (grampozitivní modrofialové, gramnegativní růžové)
[editovat] Podrobnější postup
[editovat] Příprava preparátu
Stěr se nanáší na dobře odmaštěné podložní sklíčko a vysuší se suchým vzduchem. Fixaci lze provést až po úplném vyschnutí vzorku.
[editovat] Fixace
Cílem fixace je kromě stabilizace preparátu i usmrcení buněk, neboť barvení mrtvých buněk dává lepší výsledek. Fixaci lze provést mechanickou či chemickou cestou - při mechanické fixaci se stěr fixuje dvojím či trojím protažením nad horní částí svítivého plamene hořáku, celková doba ohřevu nesmí přesáhnout dobu 2 sekund. Fixace se prověří přiložením preparátu k zápěstí - podložní sklíčko musí být horké, nikoliv žhavé (70-80 °C). Při chemické fixaci se preparát ponoří na 10-15 minut do nádoby s fixativem (metylakoholem, acetonem, nebo Nikiforovým činidlem) a po fixaci se usuší na vzduchu.
[editovat] Barvení G+
- Na fixovaný preparát se přes filtrační papír nalije základní trifenylmetanové barvivo (genciánová, metylová nebo krystalická violeť) a nechá se působit 2-3 minuty
- Základní barvivo se slije a preparát se ponoří do Lugolova, případně Gramova činidla (vodný roztok jodidu draselného a krystalického jódu 2:1) až do zčernání vzorku - cca 1 až 2 minuty
- Preparát se promývá roztokem 96% etylalkoholu či metyalkoholu do plného odbarvení G- (několik desítek sekund, promývající kapalina musí být bezbarvá)
[editovat] Barvení G-
- Preparát se vymyje destilovanou vodou po dobu 2 minut
- Obarvení G- skupiny se provede fuchsinem nebo safraninem po dobu 3-5 minut.
- Preparát se promyje destilovanou (v nouzi pouze běžnou tekoucí) vodou a vysuší filtračním papírem.
