Izoelektrická fokusace
Z Wikipedie, otevřené encyklopedie
Izoelektrická fokusace je elektromigrační separační metoda proteinů. Dělení touto metodou probíhá na základě migrace proteinů v prostědí proměnlivého pH. V zásaditém prostředí mají proteiny záporný náboj a putují tedy k anodě. V kyselém prostředí naopak mají celkový náboj kladný a putují ke katodě. V pH rovném izoelektrickému bodu, pI, je molekula neutrální.
Izoelektrická fokusace probíhá na gelu (polyakrylamidový, agarosový, a jiné) se stálým pH gradientem. Po aplikaci napětí pak putuje protein do místa svého izoelektrického bodu a na tomto místě se fokusuje, neboť průchodem tímto bodem se bílkovina přepóluje a putuje pomaleji do protisměru, dokud se nezastaví v pI. Izoelektrickou fokusací je možné dosáhnout separace bílkovin, které se liší v hodnotách izoelektrických bodů i o 0,01.
Gradient pH je vytvářen směsí polyamfolytů (například malých polymerů s jinými hodnotami pI). Póry gelu bývají voleny velké, aby se nedocházelo k narušování separace síťovým jevem. Je nutné, aby se gradient aplikací elektrického proudu neničil. Používají se poměrně vysoké hodnoty napětí v řádech desítek kilovoltů.
Izoelektrická fokusace je prvním krokem 2D-elektroforézy.
