Anticorps monoclonaux

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Les anticorps monoclonaux sont des anticorps qui sont identiques car issus d'une seule lignée de plasmocytes, provenant d'une seule cellule.

[modifier] Obtention

L'obtention des anticorps monoclonaux a lieu en plusieurs étapes.

La première est une inoculation d'un antigène ou d'un haptène à un animal de laboratoire, souvent un rongeur, ce qui a pour effet de produire des plasmocytes libérant des anticorps contre cet antigène. Plusieurs anticorps différents sont produits pour combattre l'antigène. Il est possible d'obtenir des anticorps reconnaissant des substances qui ne sont pas immunogéniques, en les liant à des protéines immunogéniques, comme la BSA.

Ensuite l'animal est sacrifié et les plasmocytes sont récupérés dans la rate. Ceux-ci, ayant perdu toute faculté de division, sont fusionnés avec des myélomes (cellules cancéreuses, donc aptes à une division cellulaire rapide et immortelles). Une première étape de purification permet de récupérer seulement les cellules hybrides, qui produisent des anticorps polyclonaux. Ces hydridomes sont des cellules cancéreuses, donc elles se multiplient rapidement et indéfiniment.

Puis arrive la sélection des lignées de plasmocytes, qui permet d'obtenir une ou plusieurs séries d'anticorps monoclonaux. Cette sélection s'opère par dilution limite pour permettre l'isolation de clones uniques. Chaque clone est testé, la plupart du temps en Western Blot, pour vérifier sa capacité à lier l'antigène ou l'haptène utilisé pour l'immunisation. Les anticorps sécrétés sont ensuite testé pour éliminer ceux qui induisent des réactions croisées avec d'autres antigènes.

Après la séléction, la production de lots d'anticorps se fait par purification d'un milieu biologique contenant l'anticoprs en solution, celui-ci étant soit un ascite produit chez l'animal (c'est à dire une injection intrapéritonéale de l'hybridome dans un animal préparé à l'avance), soit un surnageant de culture cellulaire ayant servi à cultiver l'hybridome in vitro. La purification proprement dite peut se faire de différentes manières, comme par exemple la chromatographie liquide haute performance.

Une fois obtenu un clone d'hybridome sécrétant un anticorps de spécificité voulue, il est possible de déterminer la séquence du gène des immunoglobulines de ce clone, de le sous-cloner et de le modifier. Ceci permet de produire des anticorps chimériques ou humanisés, ou encore de produire uniquement le fragment de l'anticorps Fab reconnaissant l'antigène... Les applications varient du strict usage de laboratoire à l'application clinique.

[modifier] Emplois

Les anticorps monoclonaux ont de multiples applications en recherche et en diagnostic, clinique humaine et animale, exploitant la reconnaisance de protéines en biologie, ou encore être utilisés comme médicaments (quelques exemples)