Citometria de fluxo
Origem: Wikipédia, a enciclopédia livre.
A técnica de citometria de fluxo é usada para contar e analisar as características físicas e moleculares de partículas microscópicas (ex.: células) num meio líquido. Um feixe de luz (normalmente laser) de uma única frequência (cor) é direccionado a um meio líquido em fluxo. Estão apontados ao local onde a corrente do fluido passa através do feixe de luz alguns detectores: (i) Forward Scatter ou FSC, que está na linha do laser e atrás da zona onde passam as partículas, e é uma medida do volume das partículas; (ii) Side Scatter ou SSC, que está perpendicular à direcção do laser, e é uma medida da complexidade das células, i.e., forma do núcleo, quantidade e tipo de grânulos citoplasmáticos ou rugosidade membranar: (iii) Detectores fluorescentes (um ou mais), também perpendiculares à direcção do laser.
Cada partícula que passa através do feixe de luz dispersa-a de alguma forma e os corantes químicos na partícula podem ser excitados de modo a emitir luz numa frequência mais baixa que a da fonte de luz. Esta combinação de luz dispersa e fluorescente é detectada pelos detectores e analisando as flutuações de brilho de cada detector (um para cada pico de emissão fluorescente) é possível vários factos sobre a estrutura física e química de cada partícula individual.
Os parâmetros possíveis de medir são: volume e complexidade morfológica das células, pigmentos celulares como clorofila, ADN (análise de tipo de células, cinética celular, proliferação, etc.), RNA, análise e classificação de cromossomas, proteínas, antigénios à superfície celular (marcadores CD), antigénios intracelulares (várias citosinas, mediadores secundários, etc.), antigénios nucleares, actividade enzimática, pH, cálcio ionizado intracelular, magnésio, potencial membranar, fluidez membranar, apoptose (quantificação, medidas da degradação do ADN, potencial da membrana mitocondrial, alterações na permeabilidade, actividade da caspase), viabilidade celular, monitorização da electropermeabilização das células, caracterização da multi resistência a fármacos em células tumorais, glutationa, várias combinações (ADN/antigénios de superfície, etc.). Esta lista é muito longa e está em constante expansão.
