Hoechst (barwnik)

Z Wikipedii

Barwniki Hoechst - rodzina barwników fluorescencyjnych, bis-benzimidazoli, wybarwiających DNA na zasadzie interkalacji ^[1],[2]. Powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych, chromosomów lub mitochondriów (poprzez wizualizację DNA) w mikroskopii fluorescencyjnej ^[3],[4]. Najpopularniejsze z rodziny są barwniki Hoechst 33258 oraz Hoechst 33342. Nazwa tych barwników pochodzi od nazwy niemieckiej firmy farmaceutycznej Hoechst AG.

Barwniki te (33258 i 33342) są wzbudzane światłem ultrafioletowym przy długości fali świetlnej około 350nm. Maksimum emisji wypada przy 461nm (kolor niebiesko-fioletowy) ^[5]. Ponieważ Hoechst przenika przez nienaruszone błony biologiczne, może być używany do wybarwiania zarówno żywych komórek^[6] jak i utrwalonych i często bywa używany jako substytut innego barwnika - DAPI ^[7]. Różnica pomiędzy nimi, wynika z tego, że Hoechst 33342, wyposażony w dodatkową grupę etylową, jest bardziej lipofilowy, w związku z czym lepiej przenika przez nienaruszone błony biologiczne. Z kolei Hoechst 33258, w niektórych zastosowaniach, ma znaczącą mniejszą zdolność penetracji komórek ^[7].

Barwniki Hoechst nadają się także do ilościowego oznaczania DNA w próbie, gdyż siła ich sygnału jest wprost proporcjonalna do ilości DNA (porównaj podobne prawo Lamberta-Beera) ^[8],[9].

Ponieważ Hoechst wiążą się bardzo ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym wpływają na jego strukturę, i mogą zaburzać replikację, związki te są toksyczne i mutagenne. Przy pracy z Hoechst powinno się zachować szczególną ostrożność.

Hoechst 33258

Hoechst 33342

[edytuj] Odnośniki

1. ↑ Comings DE. Mechanisms of chromosome banding. VIII. Hoechst 33258-DNA interaction. Chromosoma. 1975 Oct 14;52(3):229-43.
2. ↑ Giartosio A, Ferraro A, Lavaggi MV, Allegra P, Turano C. The interaction of bisbenzimide with DNA. Physiol Chem Phys Med NMR. 1984;16(6):481-90.
3. ↑ Herzog A, Schutze HR. [Fluorescent staining of mammalian chromosomes with a basically substituted bis-benzimidazole derivative (preparation 33258 "Hoechst")]] Dtsch Tierarztl Wochenschr. 1968 Oct 1;75(19):476-9.
4. ↑ Lemke PA, Kugleman B, Morimoto H, Jacobs EC, Ellison J. Fluorescent staining of fungal nuclei with a benzimidazol derivative. J Cell Sci. 1978 Feb;29:77-84.
5. ↑ Strona firmy Invitrogen oferującej barwniki (en)
6. ↑ Gregoire M, Hernandez-Verdun D, Bouteille M. Visualization of chromatin distribution in living PTO cells by Hoechst 33342 fluorescent staining. Exp Cell Res. 1984 May;152(1):38-46.
7. ↑ ^{7,0 7,1} Otto F, Tsou KC. A comparative study of DAPI, DIPI, and Hoechst 33258 and 33342 as chromosomal DNA stains. Stain Technol. 1985 Jan;60(1):7-11.
8. ↑ Downs TR, Wilfinger WW. Fluorometric quantification of DNA in cells and tissue. Anal Biochem. 1983 Jun;131(2):538-47.
9. ↑ Araki T, Yamamoto A, Yamada M. Accurate determination of DNA content in single cell nuclei stained with Hoechst 33258 fluorochrome at high salt concentration. Histochemistry. 1987;87(4):331-8.