限制性片段長度多態性
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在分子生物學中﹐限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)具有兩種涵義:一是DNA分子由於核苷酸序列的不同而產生的一種可以用來相互區別的性質;二是一種實驗技術,利用這種性質來比較不同的DNA分子。這種技術可以用於遺傳指紋和親子鑑定。
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[编辑] 方法
通常,一個獨立樣本的DNA首先被提取和純化。純化後的DNA可以用PCR反應擴增。隨後,用限制性核酸内切酶切成“限制性片段”,每種内切酶只能切除能夠識別的特殊序列。隨後,限制性片段通過瓊脂糖凝膠電泳將不同長度的片段分開。結果可以通過southern印迹法(Southern blotting)被加強。
[编辑] 結果
每個個體的酶切位點之間的距離會有差距,這樣限制性片段的長度有區別,不同個體的某個條帶的位置也會不同(也就是“多態性”)。這樣就能從遺傳水平上區分不同個體。RFLP也可以揭示不同個體之間的遺傳關係,因爲孩子從父母處繼承了染色體。這種技術也可以用來判斷各個種的生物之間的關係。
[编辑] T-RFLP
T爲terminal縮寫,即端點限制性片段長度多態性。如在16S rRNA分析中,利用一個或一對熒光標記的引物進行PCR擴增。隨後用高頻率的内切酶進行酶切。通過毛細管電泳將切開的片段分離,可檢測端部的限制性片段長度。這是快速鑒別菌株或者簡單群落的方法。
[编辑] 參見
- 擴增片段長度多態性
- 遺傳學
- 擴增核糖體DNA限制性分析(ARDRA)