Fago M13
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Il Fago M13 è un fago filamentoso, è costituito da DNA a singolo filamento ed è male-specific perché penetra nella cellula ospite attraverso il pilus.
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[modifica] Ciclo vitale
Il fago adsorbe sul pilus attraverso una proteina del capside Gp2. Il filamento di Dna che penetra nella cellula è chiamato +strand. Il Dna a singolo filamento penetrato viene convertito a doppio filamento chiamato "the replicative form" (RF).
[modifica] Replicazione del genoma
Un primer a Rna è sintetizzato per creare il filamento - complementare al filamento + per creare la forma RF. Il prodotto del gene 2(Gp2) è un endonucleasi che crea un nick sul filamento + della forma RF e rimane attaccato al 5'-P. Avviene la replicazione via rolling-circle replication, cosi si crea un filamento che continua la sintesi mentre il prodotto del gene 5(Gp5) si lega al filemanto replicato e non permette una nuova replicazione. cosi facendo si ottiene un filamento singolo pronto per essere inpachettato. Il passaggio dalla forma RF alla forma a singolo filamento dipende dai livelli di Gp5,Gp2, Gpx.
[modifica] M13 come vettore di modifice genetiche
La regione regolatoria Lac di Escherichia coli e le informazioni per il peptide α della beta-galattosidasi sono inserite nella regione IG del fago. La regione IG di circa 507 nucleotidi tra il gene 4 e il gene 2 forma delle strutture secondarie. Per essere replicato Gp2 taglia una struttura secondaria della regione IG. L'origine di replicazione del Fago M13 è inserita in un plasmide a formare un Phagemind. Questo ci serve per ottenere Dna a singolo filamento, essendo M13 un fago filamentoso, per la mutagenesi sito diretta o per il sequenziamento. La cellula che ha ricevuto il Phagemind viene superinfettata da un fago helper, un ceppo mutato del fago M13 (M13K07) che ha una mutazione (Met40->Ile) e non riconosce l'origine di replicazione del fago M13 K07 ma riconosce quella del Phagemind. Il Fago helper fornisce le proteine necessarie per ottenere Dna a singolo filamento dal Phagemind e di ottenere molte copie di ssDNa senza ottenere copie del fago M13K07 a causa della mutazione di Gp2.
